Cuarta Directiva 85/490/CEE de la Comisión, de 11 de octubre de 1985, relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados Miembros en materia de métodos de análisis necesarios para el control de la composición de los productos cosméticos Diario Oficial n° L 295 de 07/11/1985 p. 0030 - 0045 Edición especial en finés : Capítulo 13 Tomo 14 p. 0192 Edición especial en español: Capítulo 15 Tomo 6 p. 0115 Edición especial sueca: Capítulo 13 Tomo 14 p. 0192 Edición especial en portugués: Capítulo 15 Tomo 6 p. 0115 CUARTA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN de 11 de octubre de 1985 relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros en materia de métodos de análsis necesarios para el control de la composición de los productos cosméticos ( 85/490/CEE ) LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS , Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea , Vista la Directiva 76/768/CEE del Consejo , de 27 de julio de 1976 , relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros en materia de productos cosméticos (1) , cuya última modificación la constituye la Directiva 85/391/CEE (2) y , en particular , el apartado 1 de su artículo 8 , Considerando que la Directiva 76/768/CEE prevé controles oficiales de los productos cosméticos para comprobar el cumplimiento de las condiciones previstas por las disposiciones comunitarias relativas a la composición de los productos cosméticos ;
Considerando que es conveniente establecer lo antes posible todos los métodos de análisis necesarios y que , una vez realizadas tres etapas para alcanzar dicho fin mediante la fijación de determinados métodos en las Directivas 80/1335/CEE (3) , 82/434/CEE (4) , y 83/514/CEE (5) de la Comisión , la cuarta etapa debe consistir en la fijación de los métodos de identificación y determinación cuantitativa del clorobutanol de glicerol , de determinación cuantitativa del 1-(4-aminobenzoato ) de glicerol , de determinación cuantitativa del clorobutanol , de identificación y determinación cuantitativa de la quinina , de identificación y determinación cuantitativa de los bisulfitos inorgánicos , de identificación y determinación cuantitativa de los cloratos de metales alcalinos , de identificación y determinación cuantitativa del yodato sódico ;
Considerando que las medidas previstas en la presente Directiva se atienen al dictamen del Comité para la adaptación al progreso técnico de la Directiva 76/768/CEE , HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA : Artículo 1 Los Estados miembros adoptarán todas las medidas necesarias para que , en los controles oficiales de productos cosméticos : - la identificación y determinación cuantitativa del 1-(4-aminobenzoato) de glicerol , - la determinación cuantitativa del clorobutanol , - la identificación y determinación cuantitativa de la quinina , - la identificación y determinación cuantitativa de los sulfitos y bisulfitos inorgánicos , - la identificación y determinación cuantitativa de los cloratos de metales alcalinos , y - la identificación y determinación cuantitativa del yodato de sodio se realicen según los métodos descritos en el Anexo .
Artículo 2 Los Estados miembros aplicarán las disposiciones legales , reglamentarias o administrativas necesarias para cumplir la presente Directiva , a más tardar el 31 de diciembre de 1986 , e informarán de ello inmediatamente a la Comisión . Artículo 3 Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros . Hecho en Bruselas , el 11 de octubre de 1985 . Por la Comisión Stanley CLINTON DAVIS Miembro de la Comisión (1) DO n º L 262 de 27 . 9 . 1976 , p. 169 . (2) DO n º L 224 de 22 . 8 . 1985 , p. 40 . (3) DO n º L 383 de 31 . 12 . 1980 , p. 27 . (4) DO n º L 185 de 30 .
6 . 1982 , p. 1 . (5) DO n º L 291 de 24 . 10 . 1983 , p. 9 . ANEXO IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL 1-(4-AMINOBENZOATO) DE GLICEROL A . IDENTIFICACIÓN 1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN Este método sirve para poner de manifiesto la presencia del 1-(4-aminobenzoato) de glicerol o 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo . También permite identificar el 4-aminobenzoato de etilo ( benzocaína DCI ) , eventualmente presente como impureza . 2 . PRINCIPIO La identificación se realiza por cromatografía en capa fina de gel de sílice con indicador fluorescente y revelado de la función amina primaria libre por formación en la placa de un colorante diazoico .
3 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica . 3.1 . Mezcla disolvente : ciclohexano/isopropanol/diclorometano estabilizado : 48/64/9 ( v/v/v ) . 3.2 . Disolvente de desarrollo : éter de petróleo ( 40-60 ) /benceno/acetona/solución de hidróxido amónico ( mínimo 25 % de NH3 ) : 35/35/35/1 ( v/v/v/v ) . 3.3 . Revelador : solución a ) : nitrito sódico : 1 g en 100 ml de ClH 1 M , preparado justo antes de usar ; solución b ) : 2-naftol : 0,2 g en 100 ml de KOH 1 M 3.4 . Soluciones patrón : - 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo : 0,050 g en 100 ml de la mezcla disolvente ( 3.1 ) . - 4-aminobenzoato de etilo :
0,050 g en 100 ml de la mezcla disolvente ( 3.1 ) . 3.5 . Placas de gel de sílice 60 F254 , de 0,25 mm de espesor y 200 · 200 mm de tamaño . 4 . EQUIPO 4.1 . Equipo normal para cromatografía en capa fina . 4.2 . Baño de ultrasonidos . 4.3 . Filtro Millipore FH 0,5 m o equivalente . 5 . PROCEDIMIENTO 5.1 . Preparación de la muestra Pesar 1,5 g de muestra en un matraz aforado de 10 ml con tapón esmerilado . Completar hasta 10 ml con la mezcla disolvente ( 3:1 ) . Tapar y dejar durante 1 hora a temperatura ambiente en el baño de ultrasonidos ( 4.2 ) . Filtrar por el filtro Millipore ( 4.3 ) .
Utilizar el filtrado para la cromatografía . 5.2 . Cromatografía en capa fina Depositar sobre la placa ( 3.5 ) 10 l del filtrado ( 5.1 ) y 10 l de cada solución patrón ( 3.4 ) . Desarrollar el cromatrograma hasta una altura de 15 cm en una cubeta previamente saturada con el disolvente ( 3.2 ) . Dejar secar a temperatura ambiente . 5.3 . Revelado 5.3.1 . Observar la placa con luz ultravioleta de 254 nm . 5.3.2 . Sobre la placa perfectamente seca , pulverizar la solución ( 3.3 a ) . Dejar secar a temperatura ambiente durante 1 minuto y pulverizar inmediatamente la solución ( 3.3 b ) . Secar la placa en estufa de 60 ° C .
Las manchas aparecen de color naranja con los siguientes R f : 4-aminobenzoato de -monoglicerilo : 0,07 ; 4-aminobenzoato de etilo : 0,55 . B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA 1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN Este método sirve para la determinación cuantitativa del 1-(4-aminobenzoato) de glicerol ( 4-aminobenzoato de -monoglicerilo ) . También permite la determinación cuantitativa del 4-aminobenzoato de etilo . Es adecuado para la determinación como máximo de 5 % ( m/m ) de 4-aminobenzoato de -monoglicerilo y de 1 % ( m/m ) de 4-aminobenzoato de etilo . 2 . DEFINICIÓN El contenido en 4-aminobenzoato de -monoglicerilo y en 4-aminobenzoatode etilo , determinado por este método , se expresa como porcentaje en masa ( % m/m ) del producto .
3 . PRINCIPIO El producto problema se pone en suspensión en metanol , y tras el tratamiento adecuado de la muestra , se realiza la determinación por cromatografía líquida de alta presión ( HPLC ) . 4 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y , en particular , adecuados para HPLC . 4.1 . Metanol . 4.2 . Dihidrógeno-ortofosfato de potasio KH2 PO4 . 4.3 . Diacetato de cinc Zn(CH3COO)2 · 2H2O . 4.4 . Ácido acético d (20,4) = 1,05 . 4.5 . Hexacianoferrato de tetrapotasio : K4FE(CN)6) · 3H2O . 4.6 . 4-hidroxibenzoato de etilo . 4.7 . 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo .
4.8 . 4-aminobenzoato de etilo ( benzocaína ) . 4.9 . Solución tampón ( 0,02 M ) : disolver 2,72 g de dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( 4.2 ) en 1 l de agua . 4.10 . Eluyente : solución tampón ( 4.9 ) /metanol ( 4.1 ) : 61/39 ( v/v ) . La composición de esta fase móvil puede modificarse de forma que el factor de resolución R sea igual o superior a 1,5 : R = 2 ( d'R2 - d'R1 ) / ( W1 + W2 ) donde : R1 y R2 = tiempos de retención , expresados en minutos , de dos picos , W1 y W2 = anchura , expresada en mm , de los mismos picos a media altura , d' = velocidad del papel mm/minuto . 4.11 .
Solución madre de 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo : pesar con precisión unos 40 mg de 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo en un matraz aforado de 100 ml . Disolver en 40 ml de metanol ( 4.1 ) . Completar hasta la marca de enrase con la solución tampón ( 4.9 ) y mezclar . 4.12 . Solución madre de 4-aminobenzoato de etilo : pesar con precisión unos 40 mg de 4-aminobenzoato de etilo en un matraz aforado de 100 ml . Disolver en 40 ml de metanol ( 4.1 ) . Completar hasta la marca de enrase con la solución tampón ( 4.9 ) y mezclar . 4.13 . Solución del patrón interno : pesar con precisión unos 50 mg de 4-hidroxibenzoato de etilo ( 4.6 ) en un matraz aforado de 100 ml .
Disolver en 40 ml de metanol ( 4.1 ) . Completar hasta la marca de enrase con la solución tampón ( 4.9 ) y mezclar . 4.14 . Soluciones patrón : preparar cuatro soluciones patrón por disolución en 100 ml de eluyente ( 4.10 ) , según el cuadro siguiente : Solución * 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo * 4-aminobenzoato de etilo * 4-hidroxibenzoato de etilo * * ml ( 4.11 ) * µg/ml (*) * ml ( 4.12 ) * µg/ml (*) * ml ( 4.13 ) * µg/ml (*) * I * 2 * 8 * 2 * 8 * 10 * 50 * II * 4 * 16 * 3 * 12 * 10 * 50 * III * 6 * 24 * 4 * 16 * 10 * 50 * IV * 10 * 40 * 5 * 20 * 10 * 50 * (*) Estos valores se dan a título indicativo y corresponden a una pesada exacta de las soluciones 4.11 , 4.12 y 4.13 .
N.B. Estas soluciones pueden prepararse de forma diferente . 4.15 . Solución de Carrez I : disolver 26,5 g de hexacianoferrato de tetrapotasio ( 4.5 ) en agua y completar hasta 250 ml . 4.16 . Solución de Carrez II : disolver 54,9 g de diacetato de cinc ( 4.3 ) y 7,5 ml de ácido acético ( 4.4 ) en agua y completar hasta 250 ml . 4.17 . Lichrosorb Merck RP-18 , o equivalente , con tamaño medio de partícula de 5 µm . 5 . EQUIPO 5.1 . Material normal de laboratorio . 5.2 . Cromatógrafo de HPLC con detector ultravioleta de longitud de onda variable y cámara termostática a 45 ° C . 5.3 . Columna de acero inoxidable :
250 mm de longitud , 4,6 mm de diámetro interior . La columna está rellena de Lichrosorb RP-18 ( 4.17 ) . 5.4 . Baño de ultrasonidos . 6 . PROCEDIMIENTO 6.1 . Preparación de la muestra 6.1.1 . Pesar con precisión alrededor de 1 g de muestra en un vaso de 100 ml y añadir 10 ml de metanol ( 4.1 ) . 6.1.2 . Poner el vaso durante 20 minutos en un baño de ultrasonidos ( 5.4 ) . Pasar cuantitativamente la suspensión así obtenida a un matraz aforado de 100 ml con 75 ml de eluyente ( 4.10 ) como máximo . Añadir sucesivamente 1 ml de solución de Carrez I ( 4.15 ) y 1 ml de solución de Carrez II ( 4.16 ) , mezclando después de cada operación .
Completar hasta la marca de enrase con el eluyente ( 4.10 ) , mezclar de nuevo y filtrar por filtro de pliegues . 6.1.3 . Utilizando una pipeta , pasar , a un matraz aforado de 50 ml , 3,0 ml del filtrado obtenido en 6.1.2 y 5,0 ml de la solución del patrón interno ( 4.13 ) . Completar hasta la marca de enrase con el eluyente ( 4.10 ) y mezclar . Utilizar la solución así obtenida para proceder al análisis cromatográfico descrito en el punto 6.2 . 6.2 . Cromatografía 6.2.1 . Ajustar el flujo de la fase móvil ( 4.10 ) a 1,2 ml/min y la temperatura de la columna a 45 ° C . 6.2.2 . Ajustar el detector ( 5.2 ) a 274 nm .
6.2.3 . Utilizando una microjeringa , inyectar al menos dos veces 20 µl de solución ( 6.1.3 ) en el cromatógrafo y medir las áreas de los picos . 6.3 . Curva de calibración 6.3.1 . Inyectar 20 µl de cada una de las soluciones patrón ( 4.14 ) y medir las áreas de los picos . 6.3.2 . Para cada concentración , calcular la relación entre el área del pico del 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo y el área del pico del patrón interno . Trazar la curva de calibración representando esta relación en ordenadas y la relación de masas correspondientes en abscias . 6.3.3 . Proceder de la misma forma con el 4-aminobenzoato de etilo .
7 . CÁLCULO 7.1 . De la curva de calibración obtenida en 6.3 leer las relaciones de masas ( RP1 , RP2 ) correspondientes a las relaciones entre las áreas de los picos calculados en el punto 6.2.3 , donde : RP1 = masa del 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo/masa del 4-hidroxibenzoato de etilo , RP2 = masa del 4-aminobenzoato de etilo/masa del 4-hidroxibenzoato de etilo . 7.2 . A partir de las relaciones de masa así obtenidas , calcular el contenido en 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo y en 4-aminobenzoato de etilo , como porcentaje en masa ( % m/m ) , utilizando las fórmulas siguientes : g % ( m/m ) 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo = RP1 × q/6 p g % ( m/m ) de 4-aminobenzoato de etilo = RP2 × q/6 p donde : q = cantidad en mg de 4-hidroxibenzoato de etilo ( patrón interno ) pesada en el punto 4.13 , p = cantidad en g de muestra pesada en el punto 6.1.1 .
8 . REPRODUCIBILIDAD (1) 8.1 . Para un contenido en 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo del 5 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,25 % . 8.2 . Para un contenido en 4-aminobenzoato de etilo del 1 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,10 % . 9 . OBSERVACIONES 9.1 . Antes de proceder al análisis propiamente dicho , conviene determinar si la muestra no contiene ningún compuesto capaz de coincidir con el pico del patrón interno ( 4-aminobenzoato de etilo ) en el cromatograma .
9.2 . Para comprobar la ausencia de posibles interferencias , repetir la determinación cambiando en ± 10 % la proporción de metanol en la fase móvil . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL CLOROBUTANOL 1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN Este método es adecuado para la determinación cuantitativa del clorobutanol hasta la concentración máxima del 0,5 % ( m/m ) en todos los productos cosméticos , excepto en aerosoles . 2 . DEFINICIÓN El contenido en clorobutanol determinado por este método se expresa como porcentaje en masa ( % m/m ) del producto . 3 . PRINCIPIO Tras el tratamiento adecuado del producto problema , la determinación se realiza por cromatografía de gases utilizando 2,2,2-tricloroetanol como patrón interno .
4 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica . 4.1 . Clorobutanol ( 1,1,1-tricloro-2-metilpropano-2-ol ) . 4.2 . 2,2,2-tricloroetanol . 4.3 . Etanol absoluto . 4.4 . Solución patrón de clorobutanol : 0,025 g en 100 ml de etanol ( 4.3 ) , ( m/r ) . 4.5 . Solución del patrón interno de 2,2,2-tricloroetanol : 0,004 g en 100 ml de etanol ( 4.3 ) , ( m/r ) . 5 . EQUIPO 5.1 . Material normal de laboratorio . 5.2 . Cromatógrafo de gases con detector de captura de electrones 63Ni . 6 . PROCEDIMIENTO 6.1 . Preparación de la muestra Pesar con precisión de 0,1 g a 0,3 g de muestra ( p g ) en un matraz aforado de 100 ml , disolver en etanol ( 4.3 ) , añadir 1 ml de la solución del patrón interno ( 4.5 ) y completar hasta la marca de enrase con etanol ( 4.3 ) .
6.2 . Condiciones de la cromatografía de gases 6.2.1 . Las condiciones deben ser tales que el factor de resolución R de la columna sea igual o superior a 1,5 : R = 2 ( d'R2 - d'R1 ) / ( W1 + W2 ) donde : R1 y R2 = tiempos de retención , expresados en minutos , de dos picos , W1 y W2 = anchura , expresada en mm , de los mismos picos a media altura , d' = velocidad del papel en mm/mn . 6.2.2 . Como ejemplo , las siguientes condiciones proporcionan el resultado deseado : Columna * I * II * Naturaleza * Vidrio * Acero inoxidable * Longitud * 1,80 m * 3 m * Diámetro * 3 mm * 3 mm * Fase estacionaria * 10 % Carbomax 20 M TPA sobre Gaschrom Q 80-100 mesh * 5 % OV 17 sobre Chromosorb WAW DMCS 80-100 mesh * Acondicionamiento * 2 a 3 días a 190 ° C * * Temperaturas : * * * - inyectar * 200 ° C * 150 ° C * - columna * 150 ° C * 100 ° C * - detector * 200 ° C * 150 ° C * Gas de arrastre * Nitrógeno * Argón/metano ( 95/5 v/v ) * Flujo * 35 ml/mm * 32 ml/mn * 6.3 .
Curva de calibración En 5 matraces aforados de 100 ml , añadir a 1 ml de la solución del patrón interno ( 4.5 ) respectivamente 0,20 , 0,30 , 0,40 , 0,50 , 0,60 ml de la solución ( 4.4 ) y completar hasta 100 ml con etanol ( 4.3 ) . Inyectar 1 µl de cada una de estas soluciones en el cromatógrafo en las condiciones descritas en el punto 6.2.2 y trazar la curva de calibración representado en abscisas la relación de las masas clorobutanol 2,2,2-tricloroetanol y en ordenadas la relación de las superficies correspondientes . 6.4 . Inyectar 1 µl de la solución obtenida en 6.1 y proceder en las condiciones descritas en el punto 6.2.2 .
7 . CÁLCULO 7.1 . Calcular , a partir de la curva de calibración ( 6.3 ) , la cantidad " a " expresada en µg de clorobutanos de la solución ( 6.1 ) . 7.2 . El contenido en clorobutanol de la muestra ( % m/m ) se calcula según la fórmula : % de clorobutanol ( m/m ) = ( a × 10 2 ) / ( p × 10 6 ) = a/ ( p × 10 4 ) 8 . REPRODUCIBILIDAD (1) Para un contenido en clorobutanol del 0,5 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas con la misma muestra no debe pasar del 0,01 % . Nota Si el resultado es igual o superior a la concentración máxima autorizada , es conveniente comprobar la ausencia de interferencias .
IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LA QUININA A . IDENTIFICACIÓN 1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN Este método sirve para poner de manifiesto la presencia de quinina en los champúes y lociones capilares . 2 . PRINCIPIO La identificación se realiza por cromatografía en capa fina de gel de sílice y revelado de la fluorescencia azul de la quinina en medio ácido a 360 nm . Para confirmar , se puede suprimir esta fluorescencia por medio de vapores de bromo y hacer aparecer una fluorescencia amarillenta con vapores de amoníaco . 3 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .
3.1 . Placas de gel de sílice de 0,25 mm de espesor , sin indicador de fluorescencia , de 200 × 200 mm de tamaño . 3.2 . Disolvente de desarrollo : tolueno/éter dietílico/diclorometano/dietilamina : 20/20/20/8 ( v/v/v/v ) . 3.3 . Metanol . 3.4 . Ácido sulfúrico 96 % ( d (20,4) = 1,84 ) . 3.5 . Éter dietílico . 3.6 . Reactivo revelador : añadir con precaución 5 ml de ácido sulfúrico ( 3.4 ) a 95 ml de éter dietílico ( 3.5 ) en un recipiente refrigerado . 3.7 . Bromo . 3.8 . Amoníaco al 28 % ( d (20,4) = 0,90 ) . 3.9 . Quinina anhidra . 3.10 . Solución patrón : pesar con precisión unos 100 mg de quinina anhidra ( 3.9 ) y disolverlos con metanol ( 3.3 ) en un matraz aforado de 100 ml , completando hasta la marca de enrase .
4 . EQUIPO 4.1 . Equipo normal para cromatografía en capa fina . 4.2 . Baño de ultrasonidos . 4.3 . Filtros Millipore FH 0,5 µm , o equivalentes , con equipo de filtración adecuado . 5 . PROCEDIMIENTO 5.1 . Preparación de la muestra Pesar con precisión una cantidad de muestra que pueda contener unos 100 mg de quinina en un matraz aforado de 100 ml , disolver y completar hasta la marca de enrase con metanol ( 3.3 ) . Tapar y dejar durante 1 hora a temperatura ambiente en el baño de ultrasonidos ( 4.2 ) . Filtrar por el filtro ( 4.3 ) y utilizar este filtrado para la cromatografía . 5.2 .
Cromatografía en capa fina Depositar sobre la placa de gel de sílice ( 3.1 ) 1,0 µl de la solución patrón ( 3.10 ) y 1,0 µl de la solución problema ( 5.1 ) . Desarrollar el cromatograma hasta una altura de 15 cm en una cubeta previamente saturada con los vapores del disolvente ( 3.2 ) . 5.3 . Revelado 5.3.1 . Secar la placa a temperatura ambiente . 5.3.2 . Pulverizar el reactivo ( 3.6 ) . 5.3.3 . Dejar secar la placa durante 1 hora a temperatura ambiente . 5.3.4 . Observar la placa con luz ultravioleta a 360 nm . La quinina aparece en forma de mancha fluorescente de color azul intenso . Como ejemplo , la tabla siguiente reproduce los Rf de los principales alcaloides de la quina , desarrollados con el disolvente ( 3.2 ) .
Alcaloides * Rf * Quinina * 0,20 * Quinidina * 0,29 * Cinconina * 0,33 * Cinconidina * 0,27 * Hidroquinidina * 0,17 * 5.3.5 . Para confirmar la identificación de la quinina , se expone la placa durante alrededor de 1 hora a los vapores de bromo ( 3.7 ) ; la fluorescencia desaparece . Al exponer a continuación la misma placa a los vapores de amoníaco ( 3.8 ) , las manchas reaparecen con una coloración parda y , si se vuelve a examinar la placa con luz ultravioleta a 360 nm , se observa fluorescencia amarillenta . Límite de detección : 0,1 µg de quinina . B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA 1 .
OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN Este método sirve para la determinación cuantitativa de la quinina en los champúes y lociones capilares . Es adecuado para la determinación de las concentraciones máximas permitidas de 0,5 % ( m/m ) en los champúes y de 0,2 % ( m/m ) en las lociones . 2 . DEFINICIÓN El contenido en quinina determinado por este método se expresa como porcentaje en masa ( % m/m ) del producto . 3 . PRINCIPIO Tras el tratamiento adecuado del producto problema se realiza la determinación cuantitativa por cromatografía líquida de alta presión ( CLHP ) . 4 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y , en particular , adecuados para HPLC .
4.1 . Acetonitrilo . 4.2 . Dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( KH2PO4 ) . 4.3 . Ácido ortofosfórico al 85 % ( d (20,4) = 1,7 ) . 4.4 . Bromuro de tetrametilamonio . 4.5 . Quinina anhidra . 4.6 . Metanol . 4.7 . Solución de ácido ortofosfórico 0,1 M : disolver 11,53 g de ácido ortofosfórico ( 4.3 ) en agua en matraz aforado de 1 000 ml y completar hasta la marca de enrase . 4.8 . Solución de dihidrógeno-ortofosfato de potasio 0,1 M : disolver 13,6 g de dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( 4.2 ) en agua en matraz aforado de 1 000 ml y completar hasta la marca de enrase . 4.9 . Solución de bromuro de tetrametilamonio 0,1 M : disolver 15,40 g de bromuro de tetrametilamonio ( 4.4 ) en agua en matraz aforado de 1 000 ml y completar hasta la marca de enrase .
4.10 . Eluyente : ácido ortofosfórico 0,1 M ( 4.7 ) /dihidrógeno-ortofosfato de sodio 0,1 M ( 4.8 ) /bromuro de tetrametilamonio 0,1 M ( 4.9 ) /agua/acetonitrilo ( 4.1 ) : 10/50/100/340/90 ( v/v/v/v/v ) . La composición de la fase móvil puede modificarse de forma que el factor de resolución R sea igualo superior a 1,5 : R = ( d'R2 - d'R1 ) / ( W1 + W2 ) donde : R1 y R2 = tiempos de retención , expresados en minutos , de dos picos , W1 y W2 = anchura , expresada en mm , de los mismos picos a media altura , d' = velocidad del papel en mm/min . 4.11 . Sílice tratada con octadecilsilano , de granulometría 10 µm .
4.12 . Soluciones patrón : en una serie de matraces aforados de 100 ml , pesar respectivamente con precisión 5,0 , 10,0 , y 20 mg de quinina anhidra ( 4.5 ) . Ajustar con metanol ( 4.6 ) y agitar hasta disolución de la quinina . Filtrar cada solución por filtro ( 5.5 ) de 0,5 µm . 5 . EQUIPO 5.1 . Material normal de laboratorio . 5.2 . Baño de ultrasonidos . 5.3 . Cromatógrado de HPLC con detector ultravioleta de longitud de onda variable . 5.4 . Columna de acero inoxidable de 25 cm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior , rellena con sílice ( 4.11 ) . 5.5 . Filtros Millipore FH 0/5 µm , o equivalentes , con equipo de filtración adecuado .
6 . PROCEDIMIENTO 6.1 . Preparación de la muestra Pesar con precisión en un matraz aforado de 100 ml una cantidad de muestra que corresponda a unos 10 mg de quinina anhidra . Añadir 20 ml de metanol ( 4.6 ) y poner el matraz durante 20 minutos en el baño de ultrasonidos ( 5.2 ) . Completar hasta la marca de enrase con metanol ( 4.6 . ) . Mezclar la solución y filtrar una parte alícuota por el filtro ( 5.5 ) . 6.2 . Condiciones de la cromatografía - Flujo de la fase móvil ( 4.10 ) : 1,0 ml/min . - Longitud de onda del detector : 332 nm . - Volumen inyectado : 10,0 µl de solución filtrada ( 6.1 ) . - Medida del área del pico .
6.3 . Curva de calibración Introducir al menos tres veces 10,0 µl de cada una de las soluciones patrón ( 4.12 ) . Medir el área del pico y calcular su valor medio para cada concentración . Trazar la curva de calibración y comprobar que es una línea recta . 7 . CÁLCULO 7.1 . A partir de la curva de calibración ( 6.3 ) , calcular la cantidad de quinina anhidra , expresada en µg , contenida en el volumen inyectado . 7.2 . La concentración de quinina anhidra en la muestra , como porcentaje en masa , se obtiene por la fórmula siguiente : % ( m/m ) de quinina anhidra = B/A donde B = cantidad en µg de quinina anhidra contenida en los µl de la solución filtrada ( 6.1 ) , A = masa de la muestra ( 6.1 ) expresada en g .
8 . REPRODUCIBILIDAD (1) Para un contenido en quinina anhidra del orden del 0,5 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,02 % . Para un contenido en quinina anhidra del orden del 0,2 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,01 % . IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE SULFITOS Y BISULFITOS INORGÁNICOS OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN El método describe la identificación y determinación cuantitativa de los sulfitos y bisulfitos inorgánicos en productos cosméticos .
Sólo puede aplicarse a productos que tengan una fase acuosa o alcohólica y para concentraciones de hasta el 0,2 % de dióxido de azufre . A . IDENTIFICACIÓN 1 . PRINCIPIO La muestra se calienta con ácido clorhídrico , y el dióxido de azufre liberado se identifica por su olor o con ayuda de un papel indicador . 2 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica . 2.1 . Acido clorhídrico ( 4M ) . 2.2 . Papel indicador de yodato de potasio con almidón , u otro papel indicador apropiado . 3 . EQUIPO 3.1 . Material normal de laboratorio . 3.2 . Matraz de 25 ml con condensador corto de reflujo .
4 . PROCEDIMIENTO 4.1 . Poner en el matraz ( 3.2 ) unos 2,5 g de muestra y 10 ml de ácido clorhídrico ( 2.1 ) . 4.2 . Mezclar y llevar a ebullición . 4.3 . Detectar el dióxido de azufre por el olor o por medio del papel indicador ( 2.2 ) . B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA 1 . DEFINICIÓN El contenido de la muestra en sulfito o bisulfito , determinado según este método , se expresa como porcentaje en masa de dióxido de azufre . 2 . PRINCIPIO Tras acidificar la muestra , el dióxido de azufre liberado se destila y se recoge en una solución de peróxido de hidrógeno . El ácido sulfúrico formado se valora con una solución patrón de hidróxido sódico .
3 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica . 3.1 . Peróxido de hidrógeno al 0,2 % ( m/v ) . Este reactivo debe prepararse cada día . 3.2 . Acido ortofosfórico ( d 25/4 = 1,75 ) . 3.3 . Metanol . 3.4 . Solución patrón de hidróxido sódico 0,01 M . 3.5 . Nitrógeno . 3.6 . Indicador : mezcla 1:1 ( v/v ) de rojo de metilo al 0,03 % ( m/v ) en etanol y de azul de metileno al 0,05 % ( m/v ) en etanol . Filtrar la solución . 4 . EQUIPO 4.1 . Material normal de laboratorio . 4.2 . Destilador ( ver esquema ) . 5 . PROCEDIMIENTO 5.1 . Pesar con precisión unos 2,5 g de muestra en el matraz de destilación A ( ver esquema ) .
5.2 . Añadir 60 ml de agua y 50 ml de etanol ( 3.3 ) y mezclar . 5.3 . Poner 10 ml de peróxido de hidrógeno ( 3.1 ) , 60 ml de agua y algunas gotas de indicador ( 3.6 ) en el recipiente D destinado a recoger el destilado ( ver esquema ) . Añadir algunas gotas de hidróxido sódico ( 3.4 ) hasta que el indicador vire al verde . 5.4 . Proceder de la misma forma con el frasco lavador E ( ver esquema ) . 5.5 . Montar el destilador y ajustar el flujo de nitrógeno ( 3.5 ) a unas 60 burbujas por minuto . 5.6 . Introducir por el embudo 15 ml de ácido ortofosfórico ( 3.2 ) en el matraz de destilación A .
5.7 . Llevar rápidamente a ebullición y dejar hervir suavemente durante 30 minutos . 5.8 . Desconectar el recipiente D que contiene el destilado . Enjuagar el tubo y , a continuación , valorar con la solución de hidróxido sódico ( 3.4 ) hasta que el indicador ( 3.6 ) vire al verde . 6 . CÁLCULO Calcular el contenido en sulfito o bisulfito de la muestra como porcentaje en masa con ayuda de la fórmula siguiente : % ( m/m ) de dióxido de azufre = 3,2 MV/m donde : M = concentración molar de la solución de hidróxido sódico ( 3.4 ) , V = volumen en ml de hidróxido sódico ( 3.4 ) necesarios para la valoración ( 5.8 ) , m = masa en g de la muestra ( 5.1 ) .
7 . REPRODUCIBILIDAD (2) Para un contenido en dióxido de azufre del 0,2 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,006 % . Destilador de dióxido de azufre según Tanner : ver D.O. IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CLORATOS DE METALES ALCALINOS OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN El método describe la identificación y determinación cuantitativa de los cloratos en los dentríficos y otros productos cosméticos . A . IDENTIFICACIÓN 1 . PRINCIPIO Los cloratos se separan de los otros halatos por cromatografía en capa fina y se detectan por la formación de yodo producida por la oxidación del yoduro de potasio .
2 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica . 2.1 . Soluciones patrón : soluciones acuosas de clorato , bromato y yodato de potasio al 0,2 % ( m/v ) , recién preparados . 2.2 . Disolvente de desarrollo : solución de amoníaco al 28 % ( m/v ) /acetona/butanol : 60/130/30 ( v/v/v ) . 2.3 . Solución acuosa de yoduro de potasio al 5 % ( m/v ) . 2.4 . Solución de almidón del 1 al 5 % ( m/v ) . 2.5 . Ácido clorhídrico M . 2.6 . Placas de cromatografía en capa fina , ya preparadas , recubiertas con celulosa , de 0,25 mm de espesor . 3 . EQUIPO Material normal de laboratorio para cromatografía en capa fina .
4 . PROCEDIMIENTO 4.1 . Obtener el extracto acuoso de alrededor de 1 g de muestra , filtrar y diluir hasta unos 25 ml . 4.2 . Depositar sobre la placa ( 2.6 ) 2 µl de la solución ( 4.1 ) y 2 µl de cada una de las tres soluciones patrón ( 2.1 ) . 4.3 . Poner la placa en una cubeta y desarrollar por cromatografía ascendente sobre tres cuartos , aproximadamente , de la longitud de la placa con ayuda del disolvente ( 2.2 ) . 4.4 . Sacar la placa de la cubeta y dejar evaporar el disolvente ( unas 2 horas ) . 4.5 . Pulverizar sobre la placa la solución de yoduro de potasio ( 2.3 ) y dejar secar durante unos 5 minutos .
4.6 . Pulverizar sobre la placa la solución de almidón ( 2.4 ) y dejar secar durante unos 5 minutos . 4.7 . Pulverizar sobre la placa ácido clorhídrico ( 2.5 ) . 5 . LECTURA En presencia de clorato aparece una mancha azul ( eventualmente parda ) después de una media hora . Los valores de Rf son los siguientes : Halato * Rf * Yodato * 0 - 0,2 * Bromato * 0,5 - 0,6 * Clorato * 0,7 - 0,8 * Los bromatos y yodatos reaccionan inmediatamente . Hay que cuidar de no confundir las manchas de bromatos y de cloratos . B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA 1 . DEFINICIÓN El contenido de la muestra en clorato determinado según este método se expresa como porcentaje en masa de clorato .
2 . PRINCIPIO El clorato se reduce con polvo de cinc en medio ácido . El cloruro formado se valora por potenciometría con nitrato de plata . Una determinación similar previa a la reducción permite revelar la presencia eventual de haluros . 3 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica . 3.1 . Ácido acético al 80 % ( m/m ) . 3.2 . Cinc en polvo 3.3 . Solución patrón de nitrato de plata 0,1 M . 4 . EQUIPO 4.1 . Material normal de laboratorio . 4.2 . Potenciómetro equipado con electrodo indicador de plata . 5 . PROCEDIMIENTO 5.1 . Preparación de la muestra Pesar con precisión una cantidad ( m ) de unos 2 g en un tubo de centrífuga .
Añadir unos 15 ml de ácido acético ( 3.1 ) y mezclar cuidadosamente . Esperar 30 minutos y centrifugar durante 15 minutos a 2 000 rev/min . Decantar el sobrenadante en un matraz aforado de 50 ml . Repetir dos veces la centrifugación añadiendo 15 ml de ácido acético ( 3.1 ) al sedimento . Reunir las soluciones en el mismo matraz aforado y completar hasta la marca de enrase con ácido acético ( 3.1 ) . 5.2 . Reducción del clorato Tomar 20 ml de la solución ( 5.1 ) y añadir 0,6 g de cinc en polvo ( 3.2 ) . Llevar a ebullición en un matraz con condensador de reflujo . Después de 30 minutos de ebullición , dejar enfriar y filtrar .
Enjuagar el matraz con agua y lavar con ella el filtro . Mezclar el filtrado y el agua del enjuague . 5.3 . Determinación del cloruro Valorar la solución ( 5.2 ) con nitrato de plata ( 3.3 ) utilizando el potenciómetro ( 4.2 ) . Valorar de la misma forma 20 ml de la solución ( 5.1 ) con nitrato de plata ( 3.3 ) . Si el producto contiene derivados de bromo o de yodo que puedan liberar bromuros o yoduros tras la reducción , la curva de valoración presentará varios puntos de inflexión . En este caso , el volumen de la solución patrón ( 3.3 ) que corresponde al cloruro viene dado por la diferencia entre los volúmenes correspondientes al último y al penúltimo punto de inflexión .
6 . CÁLCULO El contenido de la muestra en clorato se calcula por la fórmula : % ( m/m ) de clorato = ( 20,9 ( V - V' ) M ) /m donde : V = volumen en ml de la solución de nitrato de plata ( 3.3 ) utilizada para valorar la solución ( 5.2 ) , V' = volumen en ml de la solución de nitrato de plata ( 3.3 ) utilizada para valorar la solución ( 5.1 ) , M = molaridad de la solución de nitrato de plata ( 3.3 ) , m = masa en g de la muestra ( 85.1 ) . 7 . REPRODUCIBILIDAD (1) Para un contenido en clorato del 3 al 5 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,07 % ( m/m ) .
IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL YODO SÓDICO OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN El método sirve para la identificación y la determinación cuantitativa del yodato sódico en productos cosméticos que se eliminan inmediatamente después de usarse . A . IDENTIFICACIÓN 1 . PRINCIPIO El yodato sódico se separa de los otros halatos por cromatografía en capa fina y se identifica por la oxidación del yoduro a yodo . 2 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica . 2.1 . Soluciones patrón : soluciones acuosas de clorato , bromato y yodato de potasio al 0,01 % ( m/v ) , recién preparadas .
2.2 . Disolvente de desarrollo : solución de amoníaco al 28 % ( m/v ) /acetona/butanol : 60/130/30 ( v/v/v ) . 2.3 . Solución acuosa de yoduro de potasio al 5 % ( m/v ) . 2.4 . Solución de almidón del 1 al 5 % ( m/v ) . 2.5 . Ácido clorhídrico M . 3 . EQUIPO 3.1 . Placas de cromatografía en capa fina , ya preparadas , recubiertas con celulosa , de 0,25 mm de espesor . 3.2 . Material normal de laboratorio para cromatografía en capa fina . 4 . PROCEDIMIENTO 4.1 . Obtener el extracto acuoso de alrededor de 1 g de muestra , filtrar y diluir hasta unos 10 ml . 4.2 . Depositar 2 µl de esta solución sobre la línea de base de la placa ( 3.1 ) , así como 2 µl de cada una de las tres soluciones patrón ( 2.1 ) .
4.3 . Poner la placa en una cubeta y desarrollar por cromatografía ascendente sobre tres cuartos , aproximadamente , de la longitud de la placa con ayuda del disolvente ( 2.2 ) . 4.4 . Sacar la placa de la cubeta y dejar evaporar el disolvente a temperatura ambiente unas 2 horas . 4.5 . Pulverizar sobre la placa la solución de yoduro de potasio ( 2.3 ) y dejar secar durante unos 5 minutos . 4.6 . Pulverizar sobre la placa la solución de almidón ( 2.4 ) y dejar secar durante unos 5 minutos . 4.7 . Pulverizar finalmente el ácido clorhídrico ( 2.5 ) . 5 . LECTURA En presencia de yodato aparece inmediatamente una mancha azul ( también puede ser parda o hacerse parda con el tiempo ) , con el valor de R f aproximadamente entre 0 y 0,2 .
Los bromatos reaccionan inmediatamente , con valores de R f de 0,5 a 0,6 , y los cloratos reaccionan después de unos 30 minutos , con valores de R f de 0,7 a 0,8 . B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA 1 . DEFINICIÓN El contenido de la muestra en yodato sódico determinado por este método se expresa como porcentaje en masa de yodato sódico . 2 . PRINCIPIO El yodato sódico se disuelve en agua y se determina por cromatografía líquida de alta presión ( HPLC ) , utilizando una columna de fase inversa C18 y otra columna de intercambio amónico , dispuestas en serie . 3 . REACTIVOS Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y , en particular , adecuados para HPLC .
3.1 . Ácido clorhídrico , 4M . 3.2 . Solución acuosa de sulfito sódico al 5 % ( m/v ) . 3.3 . Solución madre de yodato sódico : 50 mg de yodato sódico en 100 ml de agua . 3.4 . Dihidrógeno-ortofosfato de potasio . 3.5 . Ortofosfato disódico dihidratado . 3.6 . Fase móvil para la HPLC : disolver 3,88 g de dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( 3.4 ) y 1,19 g de ortofosfato disódico dihidratado ( 3.5 ) en 1l de agua . El pH de la solución obtenida es 6,2 . 3.7 . Papel indicador universal , pH 1-11 . 4 . EQUIPO Material normal de laboratorio 4.1 . Filtro de papel de 110 mm de diámetro , Schleicher y Schuell n º 575 o equivalente .
4.2 . Cromatógrafo de HPLC con detector ultravioleta de longitud de onda variable . 4.3 . Dos columnas dispuestas en serie , cada una de 120 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior ; la primera columna rellena con Nucleosil ( R ) 5C18 o equivalente , y la segunda con Vydac , TM-301-SB o equivalente . 5 . PROCEDIMIENTO 5.1 . Preparación de la muestra 5.1.1 . Muestras fluidas ( champúes ) Pesar con precisión alrededor de 1,0 g de muestra en un matraz aforado de 10 ml con tapón esmerilado . Completar con agua hasta la marca de enrase y mezclar . En caso necesario filtrar la solución . Determinar la cantidad de yodato en la solución por HPLC siguiendo el punto 5.2 .
5.1.2 . Muestras sólidas ( jabón ) Dividir finalmente una parte de la muestra y pesar con precisión alrededor de 1,0 g en una probeta graduada de 100 ml un tapón esmerilado . Completar con agua hasta 50 ml y agitar enérgicamente durante 1 minuto . Centrifugar y filtrar a través de un filtro de papel ( 4.1 ) o bien dejar reposar la mezcla durante una noche al menos , agitar enérgicamente la solución gelatinosa y filtrarla por un filtro de papel ( 4.1 ) . Determinar el yodato en el filtrado por HPLC siguiendo el punto 5.2 . 5.2 . Cromatografía Flujo : 1 ml/min . Longitud de onda del detector :
210 nm . Volumen inyectado : 10 µl . Medida : área del pico . 5.3 . Calibración Pipetear respectivamente 1,0 , 2,0 , 5,0 , 10,0 y 20,0 ml de la solución madre de yodato sódico ( 3.3 ) en matraces aforados de 50 ml , completar hasta la marca de enrase con agua y agitar . Las soluciones así obtenidas contienen respectivamente 0,01 , 0,02 , 0,05 , 0,10 y 0,20 mg de yodato sódico por ml . Inyectar 10 µl de cada solución patrón en el cromatográfo ( 4.2 ) . Determinar el área del pico del yodato y trazar la curva de calibración relacionando el área del pico del yodato con la concentración de yodato sódico .
6 . CÁLCULO Calcular el contenido en yodato sódico como porcentaje en masa según la fórmula : % ( m/m ) de yodato sódico = V c/10 m donde : m = masa de la muestra ( 5.1 ) , expresada en g , V = volumen total , expresado en ml , de la solución de la muestra obtenida según el punto 5.1 , c = concentración de yodato sódico , expresada en mg/ml , obtenida a partir de la curva de calibración . 7 . REPRODUCIBILIDAD (1) Para un contenido en yodato sódico del 0,1 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,002 % .
8 . CONFIRMACIÓN 8.1 . Principio En una disolución acidificada de un producto cosmético , el yodato ( IO3 - ) se reduce a yoduro ( I - ) por la acción del sulfito y la solución obtenida se examina por HPLC . Si hay algún pico con un tiempo de retención que corresponde al tiempo de retención del yodato y desaparece después de tratar con sulfito , el pico original puede considerarse de yodato con la mayor probabilidad . 8.2 . Procedimiento Pipetear en un matraz Erlenmeyer 5 ml de la solución problema obtenida en el punto 5.1 . Ajustar el pH de la solución a un valor inferior o igual a 3 utilizando ácido clorhídrico ( 3.1 ) y papel indicador universal ( 3.7 ) .
Añadir tres gotas de la solución de sulfito sódico ( 3.2 ) y agitar . Inyectar 10 µl de la solución en el cromatógrafo ( 4.2 ) . Comparar el cromatograma con el obtenido de la forma descrita en el punto 5 para la misma muestra . (1) Según la norma ISO 5725 .